การผลิตและลักษณะสมบัติของมอนอโคลนอลแอนติบอดีต่อ Perkinsus olseni ในหอยลาย Paphia undulata

Abstract

โรคเพอร์คินซัส (Perkinsosis) เป็นโรคปรสิตในหอยสองฝาที่มีความสำคัญเชิงพาณิชย์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในหอยลาย (undulated surf clam, Paphia undulata) โดยมีสาเหตุมาจากเชื้อปรสิต Perkinsus olseni การติดเชื้อที่รุนแรงทำให้เกิดการอักเสบของเนื้อเยื่อและการตายของหอยจำนวนมากซึ่งส่งผลกระทบต่อเศรษฐกิจและสังคม จุดประสงค์ในงานวิจัยนี้จึงมีเพื่อผลิตและศึกษาลักษณะสมบัติของมอนอโคลนอลแอนติบอดีต่อ P. olseni ในหอยลาย P. undulata ภูมิคุ้มกันของหนูทดลองถูกกระตุ้นด้วย P. olseni ที่อยู่ในระยะ zoospore และ hypnospore หลังจากการหลอมรวมเซลล์และการคัดกรองจะได้มอนอโคลนทั้งหมด 11 โคลน จากการศึกษาลักษณะสมบัติเบื้องต้นของมอนอโคลนอลแอนติบอดี พบว่าความไวในการตรวจหา P. olseni ระยะ zoospore ด้วยวิธี dot blotting จะอยู่ในช่วง 2.6 x 107 ถึง 3.3 x 109 เซลล์ต่อมิลลิลิตร และระยะ hypnospore อยู่ในช่วง 1.6 x 105 ถึง 2.0 x 107 เซลล์ต่อมิลลิลิตร โดยมอนอโคลนอลแอนติบอดีที่ได้นี้มีความสามารถในการจับกับระยะต่างๆของ P. olseni ได้แตกต่างกัน มอนอโคลนอลแอนติบอดีหมายเลข 1 จะจับแบบจำเพาะต่อระยะ zoospore ในขณะที่หมายเลข 12 จะจับแบบจำเพาะต่อระยะ hypnospore ส่วนมอนอโคลนอลแอนติบอดีที่เหลือจะจับ P. olseni ที่อยู่ในทั้ง 2 ระยะ เมื่อตรวจสอบไอโซไทป์พบว่ามีมอนอโคลนอลแอนติบอดีหมายเลข 1, 9, 15, 17, 19 และ 22 เป็นชนิด IgG1 ขณะที่หมายเลข 7, 12, และ 20 เป็นชนิด IgG2b และหมายเลข 5 และ 24 เป็นชนิด IgM ทำการคัดเลือกมอนอโคลนอลแอนติบอดีมาทั้งหมด 7 โคลนโดยอาศัยวิธี dot blotting เพื่อใช้ตรวจหาเชื้อปรสิตด้วยวิธีอิมมูโนฮีสโตเคมีในเนื้อเยื่อหอยลายที่มีรายงานและไม่มีรายงานการติดเชื้อ หอยนางรม หอยแครง และหอยแมลงภู่ ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่ามอนอโคลนอลแอนติบอดีที่คัดเลือกมาจับกับเชื้อปรสิต P. olseni เฉพาะในหอยลายที่มีรายงานการติดเชื้อ แต่ไม่จับกับเนื้อเยื่อของหอยลายที่ไม่มีรายงานการติดเชื้อและเนื้อเยื่อหอยชนิดอื่นที่ถูกทดสอบ นอกจากนี้เมื่อนำมอนอโคลนอลแอนติบอดีหมายเลข 7, 12 และ 20 มาผสมใช้ร่วมกัน พบว่าประสิทธิภาพในการตรวจหาเชื้อปรสิตในเนื้อเยื่อหอยลายจะเพิ่มสูงขึ้น ทั้งนี้เนื่องจากมอนอโคลนอลแอนติบอดีทั้งสามจับที่อิพิโทปต่างกัน