การคัดแยกแบคทีเรีย ที่ผลิตพอลิแซ็กคาไรด์และลักษณะสมบัติของพอลิแซ็กคาไรด์ที่ได้

Abstract

แบคทีเรียสายพันธุ์ EN02 เป็นแบคทีเรียที่ผลิตเอกโซพอลิแซ็กคาไรด์ คัดแยกและคัดเลือกได้จากอ้อยในจังหวัดนครปฐม เมื่อวิเคราะห์พอลิเมอร์ที่ถูกไฮโดรไลซ์ด้วยกรดโดยใช้วิธี Thin Layer Chromatography (TLC) พบว่าพอลิเมอร์ที่ได้มีน้ำตาลไซโลสเป็นองค์ประกอบ ซึ่งมีค่า R[subscript f] เท่ากับ 0.7091 ส่วนประกอบของอาหารและภาวะการเจริญสำหรับการเจริญและการผลิตพอลิเมอร์ คือ อาหารสูตรดัดแปลงรวมของ Bromfield และ Tallgren ที่ประกอบด้วย ซูโครสความเข้มข้น 4.0% โดยน้ำหนัก (NH4)₂SO₄ ความเข้มข้น 1.0% และยีสต์สกัดความเข้มข้น 1.0% โดยน้ำหนัก MgSO₄⋅7H₂O 0.02% โดยน้ำหนัก K₂HPO₄ 0.9% โดยน้ำหนัก และ KH₂PO₄ 0.3% โดยน้ำหนัก ภายใต้ภาวะที่ปรับค่าความเป็นกรดเบสเริ่มต้นเท่ากับ 6.5 ด้วยอัตราเร็วการเขย่า 200 รอบต่อนาที ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 ชั่วโมง เพื่อการเจริญที่เหมาะสม จากนั้นเปลี่ยนอุณหภูมิไปที่ 40 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 16 ชั่วโมง เพื่อการผลิตพอลิเมอร์ แบคทีเรียสายพันธุ์ EN02 สามารถผลิตพอลิแซ็กคาไรด์ได้เท่ากับ 8.57 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรของน้ำเลี้ยงเชื้อ ลักษณะสมบัติของพอลิแซ็กคาไรด์ที่ผลิตได้เป็นพอลิแซ็กคาไรด์ที่มีประจุลบ (acidic polysaccharide) ประกอบด้วยปริมาณน้ำตาลทั้งหมด 88.94 เปอร์เซ็นต์ และปริมาณโปรตีน 0.29 เปอร์เซ็นต์ วิธีไฮเพอร์ฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟี และการหาความยาวคลื่นด้วยเครื่องสเปกโทรมิเตอร์ เพื่อตรวจสอบชนิดของพอลิแซ็กคาไรด์ที่ย่อยสลายด้วยกรด ซึ่งให้ความเชื่อมั่นจากขั้นตอนวิเคราะห์ด้วย TLC เบื้องต้นที่มีไซโลสเป็นส่วนประกอบ การศึกษาทางอนุกรมวิธาน โดยดูลักษณะรูปร่าง ลักษณะทางชีวเคมี และการจัดกลุ่มด้วย 16SrDNA พบว่าสายพันธุ์ EN02 เป็น Enterobacter cloacae