โครงการวิจัยเรื่อง การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเซมิคาร์บาไซด์ : รายงานการวิจัย

Abstract

ไนโตรฟูราโซน (Nitrofurazone ,NFZ) เป็นยาในกลุ่มสารไนโตรฟูแรนที่เกษตรกรนิยมใช้ในการป้องกันและรักษาโรคเกี่ยวกับระบบทางเดินอาหารในสัตว์เพื่อการบริโภค ได้แก่ โค ,สุกร ,ไก่ ,ปลา และกุ้ง ยานี้เมื่อเข้าสู่ร่างกายจะถูกเปลี่ยนเป็นสารเมแทบอไลต์ คือ เซมิคาร์บาไซด์ (Semicarbazide ,SEM) ติดกับเนื้อเยื่อ อาจเป็นสารก่อมะเร็งและก่อให้เกิดกลายพันธุ์ งานวิจัยนี้ได้ทำการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อสาร SEM หรือ สารอนุพันธ์ NPSEM ซึ่งเป็นรูปสารสำหรับการตรวจหาสารตกค้างในเนื้อสัตว์ โดยการฉีดกระตุ้นหนูทดลองด้วยอนุพันธ์ CPSEM ที่เชื่อมต่อด้วย BSA (CPAOZ-BSA) จากผลการทดลองที่ได้ พบว่า CPSEM-BSA สามารถที่จะใช้เป็นแอนติเจนในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลอง เพราะสามารถผลิตไฮบริโดมาโคลนที่ผลิตแอนติบอดี ซึ่งมีความสามารถในการจับกับสาร NPSEM และ NFZ ในรูปอิสระได้ จากการคัดเลือกไฮบริโดมาเซลล์โคลนที่ผลิตแอนติบอดีต่อสาร NPSEM มีจำนวน 22 โคลน โดยเป็นโคลนจากเซลล์หลุมต้น 11/10G และ 12/1A ซึ่งโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้นี้ ทุกโคลนสามารถจับกับ NFZ ซึ่งเป็นยาตั้งต้น และ NPSEM ในรูปอนุพันธ์ สำหรับใช้ตรวจหาสารตกค้าง โคลนที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 11/10G จะสามารถจับกับ NPSEM ได้ดีกว่าโคลนที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 12/1A และแอนติบอดีที่ได้เป็นชนิด IgG3 ส่วนโคลนที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 12/1A เป็นชนิด IgG3 และ IgM จากโคลนที่ได้เหล่านี้จึงทำการคัดเลือกโคลน 3 โคลน จากเซลล์หลุมต้น 11/10G และ 12/1A โดยเลือกจากโคลนที่สามารถจับกับ NPSEM ได้ดี คือ มีค่า IC50 ต่ำที่สุด ได้แก่ โคลนหมายเลข 8 และ 43 จากเซลล์หลุมต้น 11/10G ซึ่งมีค่า IC50 เท่ากับ 13.9 และ 13.1 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ และเลือกโคลนหมายเลข 25 จากเซลล์หลุมต้น 12/1A ซึ่งจับกับ NFZ ได้ดี มีค่า IC50 เท่ากับ 145.2 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร นำมาทำให้บริสุทธิ์โดยวิธี affinity chromatography ซึ่งโคลนทั้ง 3 หมายเลข มีปริมาณโปรตีนเท่ากับ 1.17 ,0.99 และ 1.20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ จากนั้นทำการทดสอบหาความจำเพาะของโคลนหมายเลข 8 ,25 และ 43 ต่อสาร NPSEEM และ NFZ อีกครั้ง ได้ค่า IC50 และค่า LOD ต่อสาร NPSEM ของโคลนหมายเลข 8 เท่ากับ 56.77 และ 2.96 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร โคลนหมายเลข 25 เท่ากับ 134.90 และ 4.57 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร และโคลนหมายเลข 43 เท่ากับ 23.75 และ 0.50 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร สำหรับค่า IC50 และค่า LOD ต่อสาร NFZ นั้น โคลนหมายเลข 8 มีค่าเท่ากับ 572.90 และ 8.11 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร โคลนหมายเลข 25 มีค่าเท่ากับ 903.60 และ 15.52 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร และโคลนหมายเลข 43 มีค่าเท่ากับ 142.10 และ 0.83 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร โดยเมื่อดูจากค่า IC50 และค่า LOD ของโคลนทั้ง 3 หมายเลข พบว่าทั้ง 3 โคลนมีความจำเพาะต่อสาร NPSEM มากกว่า NFZ โดยโคลนหมายเลข 43 มีความไวมากที่สุด