การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน

Abstract

แร็กโทพามีนเป็นสารเคมีที่อยู่ในกลุ่มเบต้าอะโกนิสต์และถูกยอมรับเป็นสารผสมอาหารสำหรับสุกรและโคกระบือโดยสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสหรัฐอเมริกา เพื่อกระตุ้นการเติบโตของสัตว์เลี้ยงเพื่อใช้เนื้อในการบริโภค เนื่องจากสารนี้มีผลทำให้ลดการสังเคราะห์ไขมันและเพิ่มการสังเคราะห์โปรตีน อย่างไรก็ตาม มีรายงานการวิจัยหลายฉบับได้กล่าวถึงการตกค้างของสารเบต้าอะโกนิสต์ในผลิตภัณฑ์สัตว์ซึ่งส่งผลเสียต่อมนุษย์ได้ ดังนั้นการใช้แร็กโทพามีนจึงถูกห้ามใช้ในสหภาพยุโรปและเอเชีย งานวิจัยนี้จึงมุ่งในการผลิตและศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีนเพื่อนำไปใช้พัฒนาชุดตรวจด้วยวิธี ELISA โดยทำการเชื่อมแร็กโทพามีนกับโปรตีนอัลบูมินจากซีรัมของโคสำหรับใช้เป็นแอนติเจนที่ใช้กระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลองสายพันธุ์ BALB/c จำนวน 3 ตัว ซีรัมจากหนูทั้งสามตัวให้ค่าระดับแอนติบอดีสูง ซึ่งอยู่ระหว่าง 1:64000 ถึง 1:512000 ในการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน ทำการหลอมรวมเซลล์ม้ามของหนูทดลองกับเซลล์ไมอีโลมาได้ผลผลิตเป็นเซลล์ไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีนจำนวน 5 โคลนคือ 10A4, 4B12, 10G3, 2H3 และ 3A6 จากการศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีพบว่า มีไอโซไทป์เป็น IgG1 มีความไวซึ่งคำนวณอยู่ในรูปค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้ มีค่าเท่ากับ 0.44, 15.41, 19.85, 29.25 และ 92.19 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร (ppb) ตามลำดับ นอกจากนี้โมโนโคลนอลแอนติบอดีไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มกับสารที่นำมาทดสอบ จากทั้ง 5 โคลนที่ได้โมโนโคลนอลแอนติบอดี 10A4 ให้ค่าความไวที่ดีที่สุด เมื่อหาค่า IC50 และค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้ของโมโนโคลนอลแอนติบอดีหลังทำให้บริสุทธิ์จากโคลน 10A4 มีค่าเท่ากับ 1.85 และ 0.29 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ ดังนั้นโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้จากโคลน 10A4 มีศักยภาพเพียงพอที่จะนำไปพัฒนาเป็นชุดตรวจแบบจำเพาะสำหรับตรวจสารแร็กโทพามีนได้