การสร้างดีเอ็นเอติดตามพอลิฟอสเฟตไคเนสในแบคทีเรียสะสมพอลิฟอสเฟต ที่แยกจากระบบบำบัดน้ำเสียสี่พระยา

Abstract

งานวิจัยนี้ได้คัดแยกแบคทีเรียจากตัวอย่างน้ำเสียที่มีความสามารถในการสะสมพอลิฟอสเฟตไว้ภายในเซลล์จากโรงบำบัดน้ำเสียสี่พระยา กรุงเทพมหานคร ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อน้ำเสีย จำนวน 5 สายพันธุ์ คือ CU-PK1, CU-PK2, CU-PK3, CU-PK4 และ CU-PK 5 หาความสามารถในการสังเคราะห์พอลิฟอสเฟตโดยการติดตามกิจกรรมเอนไซม์พอลิฟอสเฟตไคเนส พบว่าทั้ง 5 สายพันธุ์มีกิจกรรมของพอลิฟอสเฟตไคเนสโดยที่สายพันธุ์ CU-PK2 มีความสามารถในการสังเคราะห์พอลิฟอสเฟตสูงสุด เมื่อเพิ่มจำนวนยีน ppk ด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส โดยใช้ดีเจเนอเรตไพร์เมอร์ ที่มีความจำเพาะต่อ ppk พบว่าสามารถเพิ่มจำนวนชิ้นส่วนของยีน ppk ได้ใน CU-PK2, CU-PK5 และ Escherichia coli JM109 ซึ่งเป็นตัวควบคุมผลบวก โดยได้ผลิตภัณฑ์ขนาดประมาณ 1300 bp นำชิ้นดีเอ็นเอที่เพิ่มจำนวนได้มาติดฉลากด้วย Digoxygenin และใช้เป็นดีเอ็นเอติดตามยีน ppk ในแบคทีเรียทั้ง 5 สายพันธุ์ด้วยวิธี dot blot hybridization พบว่าตัวติดตามดีเอ็นเอทั้งสามชนิดเกิดสัญญาณไฮบริไดซ์กับ จีโนมิกดีเอ็นเอ CU-PK2, CU-PK5 และ E.coli JM109 เหมือนกัน แต่ไม่เกิดสัญญาณกับสายพันธุ์ CU-PK1, CU-PK3 และ CU-PK4 การจำแนกสายพันธุ์เบื้องต้นของ CU-PK2 และCU-PK5 โดยอาศัยลักษณะทางสัณฐานวิทยาและข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์ของ 16S rDNA พบว่าลำดับนิวคลีโอไทด์ของ CU-PK2 มีความคล้ายคลึงกับ Klebsiella oxytoca และ CU-PK 5 มีความคล้ายคลึงกับ Enterobacter aerogenes