การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ต้านกรดออกโซลินิค

Abstract

กรดออกโซลินิค (oxolinic acid) เป็นสารปฏิชีวนะสังเคราะห์ในกลุ่มของควิโนโลน (quinolone) ที่มีขอบเขตการออกฤทธิ์ในวงกว้างในการยับยั้งการเจริญของแบคทีเรียชนิดแกรมบวก และแกรมลบ ซึ่งได้รับการนำมาใช้อย่างแพร่หลายในการรักษาโรคติดเชื้อในสัตว์และมนุษย์ แต่จากการตกค้างของกรดออกโซลินิคในผลิตภัณฑ์สัตว์ เป็นสาเหตุให้เกิดผลกระทบต่อมนุษย์และเกิดการดื้อยา ดังนั้นจึงมีความจำเป็นต้องมีการตรวจการตกค้างของสารในผลิตภัณฑ์ดังกล่าว ในงานวิจัยนี้จึงมุ่งที่จะผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อกรดออกโซลินิค เพื่อใช้ในการพัฒนาชุดตรวจสอบด้วยวิธี ELISA โดยทำการเชื่อมต่อกรดออกโซลินิคกับอัลบูมินจากซีรัมของวัวและใช้เป็นตัวกระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลองสายพันธุ์ BALB/c และ ICR ซึ่งหนูทดลองทุกตัวมีการตอบสนองโดยการสร้างแอนติบอดีต่อกรดออกโซลินิคและมีระดับแอนติบอดี 1:512,000 ถึง 1:4,096,000 เพื่อสร้างโม-โนโคลนอลแอนติบอดีต่อกรดออกโซลินิค จึงทำการหลอมรวมเซลล์ม้ามของหนูทดลองกับเซลล์มัยอีโลมา P3X พบว่าได้เซลล์ไฮบริโดมาที่ผลิตแอนติบอดีต่อกรดออกโซลินิคจำนวน 2 โคลน คือ 7/A3/B6 และ 10/D5/A4 จากการศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้พบว่าเป็นไอโซไทป์ ชนิด IgG2aทั้ง 2 โคลน และมีความไวที่คำนวณในรูปของค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้มีค่าเท่ากับ 0.27 และ 0.18 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ และโมโน-โคลนอลที่ได้เกิดปฏิกิริยาข้ามกับสารในกลุ่มควิโนโลนที่นำมาทดสอบ คือ เอนโรฟลอกซาซิน อีนอกซาซิน นอร์ฟลอกซาซิน โอฟลอกซาซิน และ ซิโพรฟลอกซาซินอยู่ในช่วง 7 - 11% แต่ไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกับสารนอกกลุ่มที่ทำการทดสอบ