การศึกษาผลของสารสกัดจากพริกไทยดำ (piperine) ในการยับยั้งการเจริญของเซลล์มะเร็งชนิดต่างๆ ในหลอดทดลอง

Abstract

พิเพอรีนเป็นสารอัลคาลอยด์ พบมากในพืชกลุ่มพริกไทย มีฤทธิ์ในการควบคุมการ ตอบสนองทางภูมิคุ้มกันและยับยั้งการเจริญของมะเร็งในหนู การศึกษาวิจัยชิ้นนี้ได้ทำการทดสอบ ผลของพิเพอรีนต่อการยับยั้งการเจริญของเซลล์มะเร็งมนุษย์ชนิดต่างๆ ในหลอดทดลองเป็นครั้ง แรก โดยตรวจวัดผลการยับยั้งการเจริญของเซลล์ด้วย MTS assay จากการทดลองพบว่า เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ (HT-29) กล่องเสียง (HEp-2) และปากมดลูก (HeLa) ทนต่อพิเพอรีนได้แม้ ในความเข้มข้นที่สูงถึง 200 μg/ml ในขณะที่พิเพอรีนยับยั้งการเจริญของเซลล์มะเร็งเม็ดเลือด (H9) ได้เป็นอย่างดี (IC50=14.7 + 2.1 μg/ml) อีกทั้งยังเป็นพิษต่อเซลล์ด้วย แต่จากการทดสอบ ใน Jurkat พบว่าพิเพอรีนที่ 20-100 μg/ml ยับยั้งการเจริญได้ใกล้เคียงกัน โดยยังคงมีเซลล์ที่มี ชีวิตคิดเป็น 43.1 + 2.85% แต่กลับไม่พบว่าพิเพอรีนเป็นพิษต่อ Jurkat แต่อย่างใด และเพื่อ ตรวจสอบฤทธิ์ของพิเพอรีนต่อระยะการเจริญของ Jurkat ผู้วิจัยได้ทำการตรวจวัดปริมาณดีเอ็นเอ (DNA content) เพื่อบ่งชี้ระยะของเซลล์ในวัฏจักรเซลล์ เมื่อทดสอบที่เวลา 24, 48 และ 72 ชั่วโมง พบว่าพิเพอรีนที่ 100 μg/ml ชักนำให้มีเซลล์ในระยะ G0/G1 เพิ่มขึ้นจาก 46.55%, 43.79% และ 32.47% ในกลุ่มควบคุมเป็น 56.09%, 62.50% และ 63.53% ตามลำดับ การตรวจสอบสัณฐาน วิทยาของเซลล์โดยการย้อมด้วย AO/EB พบว่าพิเพอรีนที่ 40 μg/ml ส่งผลให้นิวเคลียสของเซลล์ เริ่มหดตัวเป็นก้อนขนาดเล็กที่เวลา 48 ชั่วโมงซึ่งคิดเป็น 1% Apoptotic cells และเมื่อตรวจสอบ PS บนผิวเซลล์ด้วย Annexin V-FITC เพื่อตรวจวัดด้วยโฟลไซโตมิเตอร์พบว่า ณ เวลา 3, 6, 9, 12 และ 24 ชั่วโมง พิเพอรีนทุกความเข้มข้นที่ทดสอบไม่ชักนำให้เกิด Apoptosis แต่อย่างใด จากการ ทดลองข้างต้นสรุปได้ว่าพิเพอรีนยับยั้งการเจริญของ Jurkat โดยการชักนำให้เกิด cell cycle arrest แต่ไม่ชักนำให้เกิด Apoptosis ทั้งนี้คณะผู้วิจัยจะได้ทำการทดสอบเพิ่มเติมในระดับลึกเพื่อ ยืนยันการเกิด G0/G1 arrest ต่อไป