Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/71795
| Title: | การปรับปรุงสายพันธุ์เพื่อการผลิตเอนไซม์เดกซ์แทรนเนสของ Penicillium sp. สายพันธุ์ 61 |
| Other Titles: | Strain improvement for the dextranase production by Penicillium sp. 61 |
| Authors: | สุวรรณา นพพรพันธุ์ |
| Advisors: | สุเทพ ธนียวัน |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย |
| Subjects: | น้ำตาลทราย -- การผลิต น้ำตาลทราย -- การผลิต เพนนิซิลเลียม เด็กซ์แทรนเนส |
| Issue Date: | 2538 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | Penicillium sp. สายพันธุ์ 61 เป็นสายพันธุ์ตั้งต้นที่คัดแยกได้จากดิน สามารถผลิตเดกซ์แทรนเนสได้ 86 หน่วยต่อมล. เมื่อทำการฉายแสงอุลตราไวโอเลตนาน 4 – 10 นาที พบว่าสามารถคัดเลือกได้สายพันธุ์ SMCU 1-80 ซึ่งผลิตเดกซ์แทรนเนสได้ 152 หน่วยต่อมล. เมื่อกลายพันธุ์สปอร์ของรานี้ต่อด้วยสาร NTG (N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine) ที่มีความเข้มข้น 0.3 มก. ต่อมล. เป็นเวลา 20-40 นาที 37 องศาเซลเซียส จะได้สายพันธุ์กลายพันธุ์ที่ผลิตเดกซ์แทรนเนสได้สูงจำนวนหนึ่งและเมื่อทำซ้ำอีกครั้งด้วย NTG จะได้สายพันธุ์ SMCU 3-14 ซึ่งกลายพันธุ์จาก SMCU 2-86 ซึ่งผลิตเดกซ์แทรนเนสได้ 330 หน่วยต่อมล. โดยมีความเสถียรสำหรับการสร้างเดกซ์แทรนเนส แม้ผ่านการถ่ายเชื้อ 20 ครั้ง พบว่าภาวะที่เหมาะสมต่อการผลิตเดกซ์แทรนเนสของรา SMCU 3-14 ครือเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิห้อง (30-35 องศาเซียส) ความเป็นกรดด่าง 4.0 โดยมี 1% เดกซ์แทรนเป็นสารชักนำการสร้างเอนไซม์ ซึ่งให้ผลผลิตเดกซ์แทรนเนส 390 หน่วยต่อมล. โดย SMCU 3-14 นี้ สามารถชักนำการผลิตเดกซ์แทรนเนสด้วย 1% เดกซ์แทรน ได้ดีกว่าสายพันธุ์ตั้งต้น ภาวะที่เหมาะสมต่อการทำงานของเดกซ์แทรนเนสคือ อุณหภูมิ 55 องศาเซียเซียส ความเป็นกรดด่าง 4.5-5.0 ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ 0.0225-0.0675 โมลาร์ เอนไซม์เดกซ์แทรนเนสข้างต้น จะให้แอนคติวิตี 600 หน่วยต่อมล. เมื่อทำการวิเคราะห์ภายใต้ภาวะนี้เอนไซม์มีความเสถียรต่อความเป็นกรดด่างในช่วง 3.5-8.0 ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ 0.0095.0.475 โมลาร์ จะสูญเสียแอคติวิตีเกือบสมบูรณ์ เมื่อบ่มที่อุณหภูมิ 55 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที การศึกษาทางจลนพลศาสตร์พบว่า ค่า Km ของเดกซ์แทรนเนสต่อเดกซ์แทรน T-2000 ลดต่ำลงเป็น 0.408 x 10-6 โมลาร์เมื่อเทียบกับสายพันธุ์ตั้งต้น |
| Other Abstract: | Penicillium sp. 61, a wild type organism isolated from soil was found capable of producing dextranase at 86 units/ml. Upon exposing to a UV-light for 4-10 minutes, a mutant strain designated SMCU 1-80 was isolated that capable of producing dextranase at 152 units/ml. Further treatment of spores thereof with 0.3 mg/ml of NTG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine) for 20-40 minutes at 37 ๐c resulted in a number of mutants with high dextranase activities. Additional round of treatment with NTG yielded another high producer strain, SMCU 3-14, a mutant of the first NTG treated SMCU 2-86 with ability of producing dextranase at 330 units/ml. Such mutant could retain the same level of dextranase production even after 20 rounds of subculture. Optimum conditions for dextranase production were cultivation at room temperature (30-35 ℃), pH 4.0 with 1% dextran as inducer by which the organism could produce dextranase at 390 units/ml. The mutant SMCU 3-14 could produce dextranase in response to the induction by 1% dextran better than that of wild type. Optimum conditions for dextranase activity were at 55 ℃, pH 4.5-5.0 in 0.0225-0.0675 M buffer such condition gave the above dextranase with activity of 600 units/ml. Enzyme exhibited stability to pH from 3.5 to 8.0 in 0.0095-0.475 M buffer while completely lost the activity at 55 ℃, 30 minutes. Kinetic study of the enzyme revealed a over apparent Km value of 0.408 X 10-6M toward substrate dextran T-2000 in comparison to that of wild type. |
| Description: | วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2538 |
| Degree Name: | วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต |
| Degree Level: | ปริญญาโท |
| Degree Discipline: | จุลชีววิทยา |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/71795 |
| ISSN: | 9746325337 |
| Type: | Thesis |
| Appears in Collections: | Grad - Theses |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Suwanna_no_front_p.pdf | หน้าปก บทคัดย่อ และสารบัญ | 1.26 MB | Adobe PDF | View/Open |
| Suwanna_no_ch1_p.pdf | บทที่ 1 | 1.42 MB | Adobe PDF | View/Open |
| Suwanna_no_ch2_p.pdf | บทที่ 2 | 1.2 MB | Adobe PDF | View/Open |
| Suwanna_no_ch3_p.pdf | บทที่ 3 | 3.5 MB | Adobe PDF | View/Open |
| Suwanna_no_ch4_p.pdf | บทที่ 4 | 1.18 MB | Adobe PDF | View/Open |
| Suwanna_no_back_p.pdf | บรรณานุกรม และภาคผนวก | 1.08 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.